微生物与感染
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微生物与感染
2017年 12卷 2期
刊出日期 2017-04-25

导读
特约专稿
论著
综述
   
导读
65 瞿涤
导读与评论(2017年第2期)

结合目前出现的新现和再现传染病及其病原体,本刊特邀请专家撰写了有关专题。上海疾病预防控制中心急性传染病防治科的潘浩等报道了我国首次在来自安哥拉的上海入境人员中发现Ekpoma病毒(Ekpoma virus,EKV)(上海出入境检验检疫局行核酸检测),并评估了其对上海市公共卫生的潜在风险,这是继2015年在尼日利亚发现EKV以来全球第2次报道。EKV 属弹状病毒科Tibrovirus属的未分类病毒,主要感染牛,传播媒介为库蠓。目前尚无证据表明EKV 的致病性,也不清楚其在人群中的流行病学特点。虽然该个案对上海乃至全国造成的公共卫生风险极低,但建议关注其研究进展。陆路教授等针对近2年出现的寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)引发的小头症,综述了ZIKV 的流行病学、 ZIKV与小头畸形因果关系等的研究进展及其疫苗和治疗药物的研究现状,提示在细胞水平和动物模型中ZIKV可损伤胚胎脑部发育,因此预防更为迫切。本期有2篇论著涉及假丝酵母基因与耐药相关性的研究......

2017 Vol. 12 (2): 65-65 [摘要] ( 136 ) [HTML ( )] [PDF 160KB] ( 291 )
特约专稿
66 柏鸿凌*,金必红*,何懿,冷培恩,陈蓉,朱奕奕,张春哲,徐方,潘浩,吴寰宇
Ekpoma病毒及其感染特征的研究进展

我国首次在来自安哥拉的上海入境人员中检测到Ekpoma病毒(Ekpoma virus,EKV),这也是继2015年在尼日利亚发现该病毒以来全球第2次报道。EKV属弹状病毒科Tibrovirus属未分类病毒,有EKV-1和EKV-2两个亚型,传播媒介为库蠓。目前EKV尚未培养成功,也无证据表明其感染是否能致病或在人群中流行。风险评估结果显示,我国检出的EKV个案对上海乃至全国造成的公共卫生风险极低,但需进一步关注其进展,为防控做好准备。

2017 Vol. 12 (2): 66-69 [摘要] ( 243 ) [HTML ( )] [PDF 721KB] ( 759 )
70 汪小欢1,2,邹鹏1,黎媛1,陆路1,2
寨卡病毒引发小头症?关系越确定,防治越迫切!

自2015年初至今,寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)以巴西为首先后在数十个国家和地区暴发流行。几乎同时,与日俱增的小头症患儿使全球对此陷入警惕状态。目前,全球正在积极探索ZIKV感染所能引发的各种神经系统疾病。在越来越多证据证明ZIKV能直接损害胚胎脑部发育的同时,ZIKV感染者的防治需求也越来越迫切。本文从ZIKV的流行病学、与小头畸形因果关系的研究进展及预防疫苗和治疗药物的研究现状等方面进行概述。

2017 Vol. 12 (2): 70-78 [摘要] ( 206 ) [HTML ( )] [PDF 1033KB] ( 1273 )
论著
79 郭佳慧,文荣,王玉燕,张浩旸,刘红,徐娅佳,叶荣
鼠冠状病毒核衣壳蛋白的抗体制备与抗原决定簇分析

核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白有稳定病毒基因组、调控病毒复制及细胞状态的特殊作用。鼠肝炎病毒(murine hepatitis virus,MHV)为乙型冠状病毒属的原型病毒,是研究冠状病毒N蛋白功能的经典模型。本研究用去污剂处理鼠冠状病毒粒子暴露N蛋白,另用原核表达纯化的重组N蛋白分别免疫小鼠,制备多克隆及单克隆抗体。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和蛋白免疫印迹分析结果显示两类抗体均具有高灵敏度和特异度,与甲型冠状病毒猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的N蛋白无交叉反应。原核表达缺失突变的N蛋白分析结果显示,多克隆抗体与单克隆抗体2E6识别的鼠冠状病毒N蛋白抗原决定簇完全一致,位于N端结构域(N-terminal domain,NTD)C端与SR之间的58个氨基酸残基内。此外,基于单克隆抗体2E6的ELISA及免疫荧光法能检测到感染细胞中和培养上清液中的N蛋白组分,且其含量与病毒复制的滴度一致。这些结果表明,鼠冠状病毒复制过程中粒子与细胞中的N蛋白可能维持相似的结构,使NTD与SR之间的部分氨基酸残基一直暴露在表面,从而形成了优势抗原决定簇。

2017 Vol. 12 (2): 79-88 [摘要] ( 217 ) [HTML ( )] [PDF 4520KB] ( 949 )
89 张浩,王千,刘伟
两株希木龙假丝酵母14α-去甲基化酶基因(ERG11)的克隆及其功能初步验证

为探讨希木龙假丝酵母(假丝酵母又称念珠菌)的耐药机制,首先克隆出两株希木龙念珠菌ERG11基因,初步验证其功能,从而为后续研究奠定基础。从美国国家生物技术信息中心(National Center of Biotechnology Information,NCBI)基因数据库中获取白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌和光滑念珠菌Erg11蛋白的保守序列,设计简并引物,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增获得希木龙念珠菌ERG11 cDNA部分片段;用快速cDNA末端扩增法(rapid amplification of cDNA ends,RACE)分别扩增其5′和3′端,获得完整的ERG11编码序列(coding sequence,CDS);将CDS克隆到pYES2表达载体中,在尿嘧啶营养缺陷型酿酒酵母中过表达ERG11;用微量液基稀释法检测转化后的酿酒酵母对氟康唑的敏感性,初步验证其功能。结果显示,简并PCR扩增获得预期708 bp片段,5′RACE和3′RACE分别获得385 bp和1 336 bp片段,经纯化、克隆、测序、比对分析,获得两株菌的ERG11 CDS;比对其编码的蛋白,与其他念珠菌的Erg11蛋白高度同源;分别检测克隆了这两株希木龙念珠菌ERG11 CDS表达载体的酿酒酵母对氟康唑的敏感性,发现过表达ERG11明显降低其对氟康唑的敏感性。结果提示,简并PCR联合RACE能准确有效地克隆出希木龙念珠菌ERG11基因,用pYES2酿酒酵母表达系统能初步验证其功能。

2017 Vol. 12 (2): 89-93 [摘要] ( 200 ) [HTML ( )] [PDF 734KB] ( 799 )
94 田园,倪琪,彭奕冰
Pdr1蛋白N端携带Flag标签的光滑假丝酵母的构建

近年来,光滑假丝酵母已成为第二位引起侵袭性真菌感染的病原体。光滑假丝酵母对唑类药物(临床一线抗真菌药物)的敏感性低且易发生耐药,一直是研究的热点。介导光滑假丝酵母对唑类药物耐药的关键基因是转录因子pdr1,其功能性突变会使Pdr1蛋白功能过度活跃,导致下游唑类药物外排泵基因高表达,从而对唑类药物耐药。本研究利用同源重组技术,构建在基因pdr1的5′端定点插入3×Flag标签的重组菌株2a2和2b2,为后续利用免疫染色质共沉淀技术寻找Pdr1直接调控基因奠定基础。结果表明,3×Flag标签添加到Pdr1蛋白N端可成功表达Flag-Pdr1蛋白;与野生型菌株相比,表达Flag-Pdr1的菌株对氟康唑的耐药性增强。此外,与野生型菌株相比,表达Flag-Pdr1的菌株中cdr1和pup1基因表达水平显著上升,提示在Pdr1蛋白N端加Flag标签能使其功能活跃,表明N端对Pdr1蛋白功能具有重要意义。

2017 Vol. 12 (2): 94-106 [摘要] ( 240 ) [HTML ( )] [PDF 4903KB] ( 983 )
综述
107 王玉,徐维祯,钟照华
CRISPR/Cas9基因编辑技术在致瘤病毒感染研究中的应用

成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9〔clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)/CRISPR-associated protein 9 (Cas9),CRISPR/Cas9〕基因编辑技术的发现源于真细菌和古细菌中CRISPR/Cas系统介导的适应性免疫机制研究。该技术利用特异性向导RNA识别靶点基因,引导核酸内切酶Cas9对其切割,并通过同源重组或非同源末端连接完成对目的DNA的编辑。某些病毒感染机体后,可将其基因组整合到宿主细胞基因组中或潜伏于组织中而无法被彻底清除,从而引起持续性感染。本文参考2013年以来CRISPR/Cas9基因组编辑技术的最新相关研究报道,重点综述其在人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)、人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV )、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)、 Epstein-Barr病毒(Epstein-Barr virus,EBV)等致瘤病毒感染相关疾病研究中的应用,并概括其作用于这些病毒的有效靶点。

2017 Vol. 12 (2): 107-112 [摘要] ( 198 ) [HTML ( )] [PDF 835KB] ( 797 )
113 李晶晶,曾玫
免疫抑制剂治疗对儿童疫苗诱导的免疫保护性的影响及其相关机制

疫苗是目前公认的预防传染病的有效手段,接种疫苗可极大降低人群传染病的发病率和病死率。随着现代医学的进展,接受免疫抑制剂治疗肿瘤、器官移植、造血干细胞移植及慢性病的患儿生存率有了很大提高,但免疫抑制剂的使用会影响疫苗诱导的免疫保护效果及儿童时期疫苗接种的安全性,使这部分免疫低下的特殊儿童成为疫苗可预防疾病的高危易感人群。本文综述了免疫抑制剂对儿童疫苗免疫保护性的影响及其相关机制。

2017 Vol. 12 (2): 113-119 [摘要] ( 332 ) [HTML ( )] [PDF 672KB] ( 945 )
120 罗婷婷1,2,王睿2,顾川佳2,何平2,华允芬1
噬菌体治疗细菌性感染及其限制因素

近年来,细菌耐药性已成为抗感染领域面临的严峻问题,临床对一些细菌性感染疾病束手无策。噬菌体疗法是一种通过噬菌体裂解细菌来治疗病原菌感染的治疗手段。噬菌体在抗菌领域表现出显著的优越性,成为目前治疗细菌性感染的研究热点。本文对近年来噬菌体治疗动物和人类病原菌感染、限制其临床应用的因素及解决措施进行综述。

2017 Vol. 12 (2): 120-125 [摘要] ( 274 ) [HTML ( )] [PDF 646KB] ( 893 )
126 谈园,吴移谋
衣原体质粒蛋白Pgp3的研究进展

衣原体中普遍含有一个7.5 kb左右的隐蔽性质粒,在衣原体物种中高度保守。Pgp3为该质粒编码的相对分子质量约28 000的免疫原性蛋白,能分泌到宿主细胞胞质中。在衣原体感染期间人类抗体可识别Pgp3的天然三聚体结构。Pgp3在衣原体致病机制中起重要作用,是诱导输卵管积液的主要毒力因子,能中和抗菌肽LL37的抗衣原体活性,且其DNA疫苗对衣原体感染具有一定的保护作用。本文就Pgp3的结构、在衣原体致病中的作用及其在疫苗与诊断抗原方面的应用进行简要概述,为进一步研究衣原体感染的发病机制及其诊断与预防提供新的思路。

2017 Vol. 12 (2): 126-130 [摘要] ( 215 ) [HTML ( )] [PDF 528KB] ( 759 )
微生物与感染
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