去N端信号肽的水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E的原核可溶性表达及其免疫原性评价

魏明童1; 夏兵兵2; 何志远2; 周炜2; 刘兴东3; 赵俊2; 4; 陈敬贤4; 王明丽2; 4

doi:10.3969/j.issn.1673-6184.2020.06.006

微生物与感染 >

2020 , Vol. 15 >Issue 6: 377 - 384

DOI: https://doi.org/10.3969/j.issn.1673-6184.2020.06.006

论著

去N端信号肽的水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E的原核可溶性表达及其免疫原性评价

魏明童1 ,
夏兵兵2 ,
何志远2 ,
周炜2 ,
刘兴东3 ,
赵俊2 ,
4 ,
陈敬贤4 ,
王明丽2 ,
4

展开

1. 安徽医科大学第一临床医学院，合肥 230060; 2. 芜湖英特菲尔生物制品产业研究院有限公司，芜湖 241000; 3. 安徽医科大学第二临床医学院，合肥 230060; 4. 安徽医科大学临床病毒学研究所，合肥 230032

收稿日期: 2020-01-02

网络出版日期: 2020-12-25

基金资助

安徽省高等学校省级质量工程项目(2012sjjd014)

收起

Soluble prokaryotic expression of varicella-zoster virus glycoprotein E without N-terminal signal peptide and its immunogenicity evaluation

WEI Mingtong1 ,
XIA Bingbing2 ,
HE Zhiyuan2 ,
ZHOU Wei2 ,
LIU Xingdong3 ,
ZHAO Jun2 ,
4 ,
CHEN Jingxian4 ,
WANG Mingli2 ,
4

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1. The First Clinical Medical College of Anhui Medical University, Hefei 230032, Anhui Province, China; 2. Wuhu Interfell Research Institute, Wuhu 241000, Anhui Province, China; 3. Second Clinical Medical College of Anhui Medical University, Hefei 230032, Anhui Province, China; 4. Institute of Clinical Virology, Anhui Medical University, Hefei 230000, Anhui Province, China

Received date: 2020-01-02

Online published: 2020-12-25

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摘要

水痘-带状疱疹病毒(varicella zoster virus，VZV)糖蛋白E(glycoprotein E，gE)是VZV亚单位疫苗的主要候选蛋白，但目前原核表达系统制备的gE蛋白以包涵体形式为主，可溶性差。本研究采用去除第1～30氨基酸序列的VZV gE胞外域基因，将其与原核表达载体pET32a连接，并转化至感受态细胞BL21(DE3)中。使用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-thiogalactoside，IPTG)诱导表达，His-tag柱纯化重组gE蛋白，蛋白质印迹法(Western blot，WB)检测其特异性。用该重组gE蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)和间接免疫荧光法检测多克隆抗体效价及特异性。结果显示，BL21/pET32a-VZV gE工程菌可以表达可溶性重组gE蛋白，纯化后纯度约为90%。WB鉴定该重组蛋白具有良好的免疫反应性。ELISA检测显示小鼠抗VZV gE多克隆抗体效价＞1∶10 000，间接免疫荧光实验结果显示该抗体特异性较高。结果表明，本研究在原核表达系统中成功表达可溶性重组VZV gE蛋白，同时该蛋白具有较强的免疫原性，这为VZV gE亚单位疫苗的研制和大规模生产奠定了基础。

关键词： 水痘-带状疱疹病毒; 糖蛋白E; 原核表达; 多克隆抗体; 免疫评价

本文引用格式

魏明童1 , 夏兵兵2 , 何志远2 , 周炜2 , 刘兴东3 , 赵俊2 , 4 , 陈敬贤4 , 王明丽2 , 4 . 去N端信号肽的水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E的原核可溶性表达及其免疫原性评价[J]. 微生物与感染, 2020 , 15(6) : 377 -384 . DOI: 10.3969/j.issn.1673-6184.2020.06.006

Abstract

Varicella zoster virus (VZV) glycoprotein E (gE) is the main candidate protein for VZV subunit vaccine. Unfortunately, the expression of gE in prokaryotic expression was mainly found in the inclusion body. In this study, a deletion of N-terminal 30 amino acids of gE was constructed on pET32a, expressed in BL21 (DE3). The soluble gE was purified and used to make polyclonal antibodies in BALB/c mice. The titer and specificity of polyclonal antibodies were determined by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescence. The results showed that the soluble recombinant gE produced by BL21/pET32a-VZV gE system is a practical way for vaccine development.

Key words： Varicella zoster virus; Glycoprotein E; Prokaryotic expression; Polyclonal antibody; Evaluation of immune

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